طیف‌سنجی UV-Vis
خدمات طیف‌سنجی جذب مرئی-فرابنفش (UV-Vis) در بازه ۱۹۰ تا ۱۱۰۰ نانومتر برای کمی‌سازی مواد بر پایه قانون بیر-لامبرت از کیمیا گوهر.
جزئیات و مشخصات طیف‌سنجی UV-Vis
خدمات طیف‌سنجی جذب مرئی-فرابنفش (UV-Vis) در بازه ۱۹۰ تا ۱۱۰۰ نانومتر برای کمی‌سازی مواد بر پایه قانون بیر-لامبرت از کیمیا گوهر.
کمی‌سازی دقیق با طیف‌سنجی UV-Vis
طیف‌سنجی جذب مولکولی مرئی-فرابنفش، ساده‌ترین و پرکاربردترین روش کمی‌سازی ترکیبات رنگی و رنگ‌سنجی‌شونده است. مطابق قانون بیر-لامبرت، جذب نمونه در طول موج مشخص با غلظت آن رابطه خطی دارد؛ بنابراین با رسم منحنی کالیبراسیون از استانداردهای معلوم، غلظت نمونه‌های مجهول به دست می‌آید. دستگاه‌های ما در بازه ۱۹۰ تا ۱۱۰۰ نانومتر با منبع دوگانه دوترویم-تنگستن کار می‌کنند و خدمات شامل کمی‌سازی یون‌ها و مولکول‌ها (آهن با اورتوفنانترولین، فسفات با مولیبدن آبی، نیترات در UV)، سنجش خلوص و غلظت DNA و پروتئین در ۲۶۰ و ۲۸۰ نانومتر، مطالعات سینتیک آنزیمی و اسکن کامل طیف برای تعیین بیشینه جذب است. کووتهای کوارتز و شیشهای متناسب با بازه طول موج استفاده و تداخلات ماتریس با بلانک مناسب حذف می‌شود.
قانون بیر-لامبرت
کمی‌سازی خطی با منحنی کالیبراسیون چندنقطه‌ای و گزارش ضریب تشخیص برای هر سری سنجش.
بازه ۱۹۰ تا ۱۱۰۰ نانومتر
پوشش کامل UV و مرئی با منبع دوترویم و تنگستن و کووت کوارتز برای طول موج‌های پایین.
سنجش DNA و پروتئین
اندازهگیری جذب در ۲۶۰ و ۲۸۰ نانومتر و محاسبه نسبت خلوص نمونه‌های بیولوژیک مانند DNA.
سینتیک واکنش
پیگیری زمانی تغییر جذب برای مطالعه سرعت واکنش‌های آنزیمی و شیمیایی و محاسبه ثابت‌ها.
روش‌های متداول UV-Vis و طول موج آن‌ها
| آنالیت | طول موج (نانومتر) | اصل روش | کاربرد |
|---|---|---|---|
| دو رشته DNA | ۲۶۰ | جذب بازهای پورین و پیریمیدین | کمی‌سازی نوکلئیک اسید |
| پروتئین | ۲۸۰ | جذب تریپتوفان و تیروزین | غلظت و تخمین خلوص |
| نسبت ۲۶۰ به ۲۸۰ | ۲۶۰ و ۲۸۰ | ارزیابی آلودگی پروتئینی | حدود ۱.۸ برای DNA خالص |
| پروتئین برادفورد | ۵۹۵ | اتصال رنگ کوماسی به پروتئین | سنجش سریع غلظت |
| آهن با فنانترولین | ۵۱۰ | کمپلکس رنگی آهن دوظرفیتی | آب، فاضلاب و خاک |
| فسفات | ۸۸۰ | مولیبدن آبی با اسید اسکوربیک | آب و پساب |
| نیترات | ۲۲۰ | جذب مستقیم در UV | غربالگری آب آشامیدنی |
سوالات متداول درباره طیف‌سنجی UV-Vis
این قانون میگوید جذب نور با غلظت ماده و طول مسیر کووت نسبت مستقیم دارد؛ در عمل، در جذبهای بسیار بالا (بالای حدود یک واحد) خطی بودن از بین میرود و پراکندگی نور و برهمکنشهای مولکولی خطا ایجاد میکند. به همین دلیل نمونهها باید در بازه جذب ۰.۱ تا ۱ رقیق یا اندازهگیری شوند.
نسبت جذب ۲۶۰ به ۲۸۰ برای DNA خالص حدود ۱.۸ و برای RNA حدود ۲ است؛ نسبت کمتر نشانه آلودگی پروتئینی است. نسبت ۲۶۰ به ۲۳۰ نیز باید حدود ۲ تا ۲.۲ باشد و مقدار پایین‌تر آن نشانه آلودگی به موادی مانند فنول و گوانیدین است. این روش سریع و مکمل روش‌های فلورسنس است.
شیشه معمولی در زیر ۳۲۰ نانومتر نور را جذب میکند و برای محدوده UV مناسب نیست؛ کووت کوارتز عبور نور تا ۱۹۰ نانومتر دارد و برای آنالیز در UV الزامی است. کووتهای پلاستیکی یکبارمصرف نیز فقط برای محدوده مرئی و UV بالای ۲۸۰ کاربرد دارند و برای اسکن دقیق توصیه نمیشوند.
بله؛ با اسکن کامل طیف در بازه ۱۹۰ تا ۱۱۰۰ نانومتر، شکل طیف و محل بیشینه‌های جذب اطلاعات اولیه درباره ماهیت ترکیب می‌دهد. شناسایی قطعی نیازمند تطبیق با طیف مواد مرجع یا روش‌های مکمل مانند HPLC است، اما برای تأیید حضور و تعیین غلظت یک ترکیب مشخص، روشی سریع و کم‌هزینه است.